TY - JOUR ID - TI - Study the Effect of Locally isolated Lactobacillus acidophilus and its components as anticancer in vivo دراسة تأثير بكتريا Lactobacillus acidophilus المعزولة محلياً ومكوناتها كعامل مضاد للسرطان في داخل الجسم الحي AU - Maareb Nazyh Rasheed1 Zahra Mahmood Al-Khafaji2 Nahi Yousif Yaseen3 PY - 2014 VL - 13 IS - 2-2 SP - 1 EP - 22 JO - Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية SN - 18154794 25207245 AB - The aim of this study was to investigate the role of Lactobacilli as a probiotic in colon cancer treatment in rats. Accordingly 29 isolates of Lactobacilli was obtained from 11 samples of feces of newborns. As well as isolating and diagnosis one isolate of Lactobacilli from standard yoghurt named (canon) which used as control for acid and bile salt tolerance. Screening of isolate according to its ability of acid resistance, showed that six isolates were able to stand in pH3.5 for 90 min. The number of living cells were 1.73×105 to 6.3×105 CFU/ml. Accordingly the number of living cells of other isolates were significantly decreased after 90 min incubation in MRS broth with pH3.5 . The isolate from standard yoghurt did not revealed high resistances to acidity since the living cells were decreased with a rrange equal about to one logarithmic cycle or more. This behaviors is important from static point of view which indicates no high acidity resistance.The isolates which appear high acidity resistance were selected to test its resistance to bile salts. Lactobacillus acidophilusone of diagnosed isolates, appeared high resistance to bile salts, since it was the most efficient isolate among the selected isolate in its high resistance to bile salts. While for Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus which was used for comparison with the other isolates, revealed no resistance for bile salts since the number Components of Lactobacillus acidophilus were separated. Colon cancer was induced in rats using Azoxymethane (AOM) at 15mg/Kg (animal body weight) by adding methyl group to guanine (O6- methyl guanine). Two restriction enzymes were used to detect the methylation. The first HpaII which is sensitive to presence of methyl group and the second is MspI which is resistant to methyl group so the samples treated with former will give a clear band of methylated DNA in gel electrophoresis while MspI will give diffused band when the DNA is methylated. The prophylactic effect (pretreatment) and the therapeutic effect (post- treatment) of Lb. acidophilus cells and its separated components was studied in vivo on the molecular level, DNA was extracted from rat colon and treated for methylation. The results revealed that the DNA extracted from treated animal showed smear in gel electrophoresis after digestion with HpaII which means that lactobacillus could modulate the DNA methylation, in contrast to positive control group which had specific DNA methylation band which indicates the presence of methyl group in the DNA of this animals.

كان الهدف من الدراسة هو استبيان دور العصيات اللبنية كأحياء علاجية في مجال التعامل مع سرطان القولون في الجرذان المختبرية وقد شملت الدراسة عزل وتشخيص 29 عزلة لبكتريا العصيات اللبنية (Lactobacilli) من 11 عينة لغائط الأطفال الرضع حديثي الولادة، فضلا عن عزل وتشخيص عزلة واحدة لبكتريا العصيات اللبنية من اللبن القياسي (كانون)، التي استخدمت لغرض المقارنة في اختبار تحمل الحموضة وأملاح الصفراء. وقد استخدم نظام API 50 CH لتشخيص العزلات. أظهرت غربلة العزلات على أساس قدرتها على مقاومة الحموضة قابلية ست عزلات على أبداء مقاومة عالية للحموضة اذ تراوحت قيم أعدادها الحية ما بين (1.73 × 105 - 6.3× 105 وحدة تكوين مستعمرات / مللتر) مقارنة بقيم الأعداد الحية لبقية العزلات بعد 90 دقيقة من حضنها في مرق MRS برقم هيدروجيني 3.5 التي انخفضت قيم أعدادها الحية بشكل معنوي ،أما في ما يخص العزلة المعزولة من اللبن القياسي لم تبد مقاومة عالية للحموضة اذ انخفضت أعدادها الحية بمدى يقارب دورة لوغاريتمية واحدة أو أكثر والتي تعد مهمة احصائيا، وبهذا لم تبد مقاومة عالية للحموضة. انتقيت العزلات التي أبدت مقاومة عالية للحموضة لاختبار مقاومتها لأملاح الصفراء، وقد أبدت بكتريا Lactobacillus acidophilus (أحدى العزلات المشخصة) مقاومة عالية لأملاح الصفراء، اذ كانت العزلة الأكفأ من بين العزلات المنتقاة في مقاومتها لأملاح الصفراء، أما بالنسبة لبكتريا Lb.delbrueckii ssp bulgaricus والتي استخدمت لغرض المقارنة مع بقية العزلات لم تبد مقاومة لأملاح الصفراء، اذ انخفضت قيم أعدادها الحية انخفاض شديد (أي أكثر من دورة لوغاريتمية واحدة). تم استحثاث سرطان القولون في الجرذان المختبرية باستخدام مادة (AOM) Azoxymethane بتركيز 15 ملغم / كغم ( وزن الحيوان ) التي تؤدي الى حث سرطان القولون، وذلك بإضافة مجموعة المثيل الى ذرة الاوكسجين السادسة في الكوانين (O6 -methyl guanine ) وقد استخدمت انزيمات القطع الحساسة وغير الحساسة لمجاميع المثيل في الكشف عن حالة المثيلة، فالانزيم HpaII لا يقطع DNAالحاوي على المثيل لذلك يظهر الاخير بشكل حزمة متماسكة، في حين ان الانزيم MspI يقطع جزيئات DNA بغض النظر عن حالة المثيلة مما يؤدي الى انتشار DNA في هلام الترحيل الكهربائي ( يظهر بشكل مسحة متواصلة ) .وقد اجريت دراسة التأثير الوقائي والعلاجي لخلايا ومكونات بكتريا Lb.acidophilus في الأنظمة الحية in vivo قبل الحقن بالمادة المسرطنة Pretreatment) ) وبعد الحقن (Post treatment) على المستوى الجزيئي وقد ظهرت نماذج DNA المستخلصة من قولون الجرذان المختبرية المعاملة بخلايا ومكونات بكتريا Lb.acidophilus بشكل مسحه صغيرة ضمن هلام الترحيل مع انزيم التقيد HpaII وهذا بدوره يعكس قابلية خلايا ومكونات بكتريا Lb.acidophilus في التأثير والتعديل في مثيلة DNA. مقارنة بنماذج DNA الخاصة بمجموعة حيوانات السيطرة الموجبة والتي ظهرت بشكل حزمة ضمن هلام الترحيل عند حضنها مع الانزيم نفسه، مما يدل على وجود مجاميع المثيل في DNA هذه المجموعة من الحيوانات. ER -