TY - JOUR ID - TI - Isolation and Puri cation of CNF1 (Cytotoxic necro- sis factor 1) produced from bacteria Escherichia coli and study its role against apoptosis in vitro عزل وتنقيه 1 CNF1 (Cytotoxic necrosis factor( المنتج من بكتيريا ا شريشيه القولونيه ودراسة دورة المضاد لعمليه الموت المبرمج خارج الجسم الحي AU - Nahi Y. Yaseen ناهي يوسف ياسين AU - May T. Flayih مي طالب فليح AU - Muthanna H. Hassan مثنى حامد حسن PY - 2015 VL - 8 IS - 2 SP - 157 EP - 163 JO - Iraqi Journal of Cancer and Medical Genetics المجلة العراقية للسرطان والوراثة الطبية SN - 20786123 23135379 AB - Through the period April - December 2012, urine specimens were collected from186 patiants attending ve hospitals. Sev- enty six isolates of uropathogenic E. coli were obtained from these samples. These isolates were identi ed as E. coli ac- cording to the cultural and morphological characteristics on MacConkey agar, eosin methylene blue agar, biochemical test (vi- tek 2 system), and API 20 E system. The results showed that only four E. coli isolates (E4, E8, E23, E36) produced cytotoxic necrosis factor 1(CNF1), and E23 was the more ef cient isolate in CNF1 production and have high activity on tissue culture. CNF1 produced from this isolate was puri ed by two steps; the rst was by ion exchange chromatography using DEAE- Sephadex, and the second step was gel ltration by Sephacryl S-100. Also study Polymerase Chain Reaction (PCR) for cnf1 gene and used primer cnf1. The size of ampli ed gene was 543pb. The cytotoxic effect of different concentrations of CNF1 on cancer lines (RD, AMN3, , Hela, PC3 and HePG2) at 72 hr were examined .The effect was manifested multinucleated and enlargement in cell line. The low IC50 was 104μg/ml against HePG2cancer cells after 72 hr. Also study multiparameter cytotoxic assay. The results revealed low concentration of cytochrome c, total nuclear intensity, cell membrane permeability in comparative positive control. The mitochondria concentration was high compared to the positive control on of cell lines in the concentration (100,25, 12.5,6.25).

خ ل الفترة الزمنية الممتدة نيسان الى ايلول عام 2012 جمعت 186 عينه ادرار من خمس مستشفيات . تم الحصول على 76 عزلة .Uropathogenic E coli وشخصت تلك العز ت طبقا للمواصفات الزرعيه على وسط اكار الدم ووسط ا يوسين المثيلين ا زرق وباختبارات كيموحيوىه وباستخدام جهاز الفايتك 2 وبنظام API 20 E. النتائج اظهرت بان اربعه عز ت من ا شريشيه القولونية قادرة على انتاج عامل CNF1((E4, E8, E23, E36 كانت )E23(اكثر كفاء من ا خرى على الزرع النسيجي ثم تم تنقيتها بطريقتين ا ولى بطريقه كروموتوكرافيه المبادل ا يوني باستخدام DEAE- Sephadex والثانية كرموتوكرافيهالترشيح اله مي بواسطه 100-Sephacryl S . درس جين cnf1 بواسطه تقنيه PCR باستخدام بادئ الجين عند الحجم 543. اختبرت تراكيز مختلفة من CNF1 في التاثيرعلى خ يا سرطانيه)RD, AMN3, , Hela, PC3 and HePG2(( بعد مرور 72 ساعه وكانت التأثيرات تعدد ا نويه وكبر حجم الخ يا وان اقل تركيز مثبط نصف الخ يا هو104μg/ml ضد HePG2 بعد مرور 72 ساعه ودرست فعالية الموت المبرمج لل CNF1 على الخ يا السرطانية بقياس التأثير على نسبه المايتوكوندريا كذلك درست مقاييس اخرى multiparameter cytotoxic assay وكانت النتائج قله تركيز السايتوكروم سي والمحتوى النووي الكلي والنفاذية ا غشية مقارنه مع عينه السيطرة الموجبة في حين كانت تراكيز عالية للمايتوكوندريا مقارنه بالسيطرةالموجبة وبتراكيز)100,25, 12.5,6.25( . ER -