TY - JOUR ID - TI - Production, Purification and characterization of bioactive compounds from locally Streptomycesrochei M78 انتاج تنقية وتوصيف المركبات الفعالة حيويا من عزله محليه لبكتريا StreptomycesrocheiM78 AU - Nadhim H. Hayder ناظم حسن حيدر AU - Marwa S. Mahmood مروة شاكر محمود PY - 2016 VL - 57 IS - 2B SP - 1165 EP - 1183 JO - Iraqi Journal of Science المجلة العراقية للعلوم SN - 00672904 23121637 AB - The aim of the current study was to optimize different cultural and environmental conditions for production the antibacterial bioactive metabolites by Streptomyces rochei M78 isolated from agriculture soil, in Baghdad, Iraq. The effect of various parameters such as, culture media, incubation time, pH, carbon and nitrogen sources, C: N ratios and inducers on antibacterial metabolite production was studied by varying single parameter at a time. It was found from the results that higher metabolite production by isolate observed using starch casein broth (SCB) as the best production medium, at initial pH 7.0.Starch andcasein +yeast extract + peptone appeared to be the best carbon and nitrogen sources respectively and C: N ratio of 4: 1 after 72 h of incubation for optimal production of antibacterial metabolites.Optimization studies indicated that antibacterial metabolites production was associated with bacterial growth, and that the presence of inducers, such asedible oils and diesel oil as well as amino acids in the medium also enhanced antibacterial metabolites production.The most bioactive compounds were produced with soybean oil as the sole carbon source, and leucine as amino acid, yielding an inhibition zone more than 35 mm against all tested pathogenic bacteria.Among different solvents used for the extraction of antibacterial metabolite, ethyl acetate was found to be the best for solvent extraction of the metabolites yielding 2.18 g /l of red to brown extract with oily nature. The antibacterial activity of different extraction fractions of the metabolites showed that the ethyl acetate extract was the most active agent against tested pathogenic bacteria.Physiochemical characteristic of antimicrobial metabolites revealed that the antimicrobial metabolite was red to brown in color, having gummy and oily nature. The purified metabolite was soluble in different solvents, with a melting point of 150 °C. The metabolites of isolate M78 were stable at pH that varies from 4 – 11, maximum antibacterial activity was found at pH 7 and at temperatures ranging from 25 to 100 °C, maximum at 25 °C. Higher bactericidal concentration (BC) of the compound against Gram positive and Gram negative bacteria was determined as 250 µg/ml. The results showed that MBC values of the active metabolite had an impact at lower concentrations than those of standard antibiotic against tested pathogenic bacteria, suggesting that the metabolite was more effective.Theminimum inhibitory concentration value of compounds was 500 µg/ml against all tested bacterial isolates. Thin layer chromatography analysis of active metabolites showed two spots having an Rf value = 0.72 and 0.80.The FTIR spectrum of antibacterial compounds exhibited the presence of OH, C=O functional ester group, and C-H and CH3 groups in the structure. GC-MS analysis of active metabolites detected a total of 23 peaks; two major hydroxylated fatty acids were then identified as octadecanoic acid, 2-(2-hydroxy ethoxy) ethyl ester and tridecanoic acid, 3 methyl-, methyl ester with relative abundance of 100 and 33.63 % respectively.

هدفت الدراسة الحالية الى تحديد الظروف الزراعية والبيئية المثلى لإنتاج المركبات الفعالة ضد البكتيرية وتوصيفها من العزلة Streptomyces rochei M78المعزولة من الترب الزراعية, في بغداد, العراق. درست تأثير العوامل المختلفة، مثل تأثير الوسط الزرعي، فترة الحضانة، الرقم الهيدروجيني، المصادر الكربونية والنيتروجينية، نسبة الكاربون : النتروجين والمحفزات على انتاج المركبات ضد البكتيرية . وجد من النتائج بان افضل انتاج للمركبات الفعالة كانت باستخدام وسط الانتاجي النشأ والكازئين، عند الرقم الهيدروجيني 7، والنشأ وكازئين+ مستخلص الخميرة+ البيبتون كأفضل وسط كاربوني ونتروجيني على الترتيب ونسبة الكاربون : النتروجين 4:1 بعد72 ساعة من الحضانة. اكدت دراسة الظروف المثلى بأن المركبات ضد البكتيرية المنتجة غير مرتبطة بالنمو، و وجود المحفزات مثل زيوت الطعام وزيت المحركات والاحماض الامينية في الوسط حفزت عملية الانتاج. معظم المركبات الفعالة حيويا انتجت بوجود زيت فول الصويا كمصدر وحيد للكاربون، والحامض الاميني الليوسين مع الحصول على قطر تثبيط اكثر من 35 ملم ضد البكتريا الممرضة. استخدمت عدة مذيبات لاستخلاص المنتوج الايضي الفعال، وجد بأن خلات الاثيل افضل مذيب للاستخلاص مع الحصول على منتوج بلغ 2.18 غم/لتر. كما اثبتت نتائج الفعالية ضد البكترية بأن مستخلص خلات الاثيل اعطى افضل فعالية مايكروبية. اظهرت الخصائص الفيزيائية- الكيميائية بأن المنتوج الفعال ذا لون احمر مائل الى البني, لزج وبطبيعة دهنية. كما وجدت من خلال النتائج بأن المنتوج الايضي المنقى جزئيا ذائب في مذيبات مختلفة, مع درجةأنصهار بلغت 150°م وذو ثباتية عالية عند الرقم الهيدروجيني من 4-11, والعظمى عند الرقم الهيدروجيني 7, وبدرجة حرارية من 25 الى 100 °م والعظمى عند 25 °م. حددت التركيز القاتل الاعلى للمنتوج ضد البكتريا الموجبة والسالبة لصبغة غرام لتكون 250 مايكروغرام/مل والتركيز المثبط الادنى للمركبات الفعالة بلغ 500 مايكروغرام/مل ضد جميع البكتريا الممرضة تحت الاختبار. بينت نتائج تحليل كروموتوغرافيا الطبقة الرقيقة للمنتج الايضي حزمتين مع قيمة ال Rfمساوية 0.72 و0.80. أظهرت نتائج طيف الFTIRبأحتواء المركبات الفعالة بكتيريا على مجموعة ال OH,O C =مجموعة الاستر, C-H ومجموعة CH3. كما ان نتائج تحاليل الGC-MS كشفت أحتواء المركبات الفعالة حيويا على 23 قمة, مع قمتين اساسيتين من الاحماض الدهنية الحاوية على الهيدروكسيل وشخصت بأنها حامض الديكانويك (2-هيدروكسي ايثوكسي) مثيل الاستر وحامض الترايديكانويك, 3 مثيل, مثيل الاستر مع وفرة نسبية بلغت 100 و33.67% على الترتيب. ER -