TY - JOUR ID - TI - Use Multiplex PCR For Detection of Some Virulence Genes of Klebsiella Isolated From Different Environmental loci استخدام تقنية Multiplex PCRلتشخيص بعض جينات الضراوة لبكتريا Klebsiella sp. المعزولة من مواقع بيئية مختلفة. AU - Zena J. Mohammed زينه جاسم محمد AU - Ali H. Abdulkareem علي حازم عبد الكريم AU - Ahmed A. Sulaiman احمد عبدالجبار سليمان PY - 2015 VL - 9 IS - 1 SP - 60 EP - 66 JO - Journal of university of Anbar for Pure science مجلة جامعة الانبار للعلوم الصرفة SN - 19918941 27066703 AB - This study includes collected of 399 samples from different sources included clinical and non clinical samples. 293 clinical samples (urine, wounds, burns, stool, sputum). Non- clinical samples included 106 samples (water, soil) from November 2014 through February 2015. 51 samples were diagnosed as K. pneumoniae using phenotypic, biochemical and cultural diagnosis features and definitely diagnosed with API20E and vaitek test. Results of antibiotic resistance against different antibiotics showed that K. pneumoniae isolated from clinical and non- clinical samples varied in their resistance to these antibiotics and all isolates were sensitive 100% to Imipenem. A number of specific primers were designed to detect bacteria by using distinct gene and also to detects resistance to antibiotics using multiplex PCR technology for the presence or absence of 8 genes(magA, rmpA, htrA, Uge-1, gent-2,blaCTX, terA-1,StrA-2) that encodes for main virulence factors to diagnose K. pneumoniae. The result showed that that 45 isolates had rmpA which might be used as detection marker, in the same reaction of multiplex PCR detection of 4 genes related with resistance to different antibiotic groups(StrA,terA,blaCTX,gent-2) were done all K,pneumoniae contained StrA gene. According to this study we can concluded that multiplex PCR can use to distinguish isolated bacteria from different sources more correctly and also to determine its antibiotic resistance that are widely used in short time and little effort without need to routine testing.

تضمنت الدراسة جمع 399عينة من بيئات مختلفة والتي شملت السريرية والغير سريرية حيث جمعت 293عينة سريرية(ادرار، جروح،حروق، خروج، قشع) اما الغيرسريرية (التربة والمياه) فقد كان مجموعها106 عينة خلال الفترة من تشرين الثاني 2014 ولغاية شباط 2015.تـم تشخيص 51 عزلة بكـتيرية تعــود الــى بكتريـــا K. pneumoniaeبأستخدام طرق التشخيص المــظهرية والــزرعية والكيموحيوية وتم تأكيد التشخيص بأستخدام API20E وبأستخدام جهازالفايتكvaitek2 .أظهرت نتائج اخـتبار مقاومــة الـمضادات للعينات الــمعزولة مـن الحالات المرضية المختلفة والمصادرالبيئية (التربة،المياه) لـ12 من المضادات الحياتية مـن مختـلف الـمجاميع تباينا فيما بينها بين مقاومة وحساسة لهذه المضادات بينما كانت البكتريا حساسة وبنسبة100% فقط للمضاد الحيوي Imipenem.صممت عـدد مـن الــبادئات المتخصصة للــكشف عــن البكتريا بــاستخدام جين مميز فيها والكشف ايضا عن مقاومتها للمضادات بأستخدام تقنية تفاعــل البلمرة الــتسـلـسلـي الـمتعدد Multiplex PCR للكشف عن وجود او غياب ثمانية انواع مــن الجينات magA, rmpA ,htrA ,Uge-1 ,gent-2, blaCTX ,terA-, StrA-2 المشفرة لعوامل الضراوة الرئيسية لتشخيص K. pneumoniae.واظهرت النتائج وجود تباين في المحتوى الجيني بين العزلات فقد احتوت 45عزلة بكتيرية على الجين rmpA والذي يمكن ان يتخذ كمؤشرتشخيصي وفي نفس التفاعل تم الكشف عــن وجودجينات مــقاومة لأربعة مــن المضادات الحياتية العائدة الـــى مجاميع مختلفة (StrA, terA ,blaCTX, gent-2) حيث احتوت كل عزلاتK.pneumoniae علــى جين StrA. ومــن خلال هـــــذه الدراسة يمكن استثمار تقنية البلمرة التسلسلية المتعددة كوسيلة لــتمييز الــبكتريا الــمعزولة مــن مــصادرمـختلفة بصورة دقيقة وتشخيص مقاومتها للمضادات الحياتية الشائعة الاستعمال بوقت قصير وجهد اقل دون الرجوع الى الفحوصات الروتينية المعروفة. ER -