TY - JOUR ID - TI - Cultivation and Detection of Unculturable Fungi in Soil Using Soil Infusion Agar(SIA). زراعة الفطريات غير القابلة للتنمية في التربة والكشف عنها باستخدام اكار منقوع التربة AU - Sajid S.Saleem AL-saeedi ساجد صلاح الدين سليم السعيدي AU - Bahrouz M.A.AL-Jaff بهروز محمود امين الجاف AU - Wijdan Ahmed Ali1, وجدان احمد علي PY - 2018 VL - 12 IS - 1 SP - 9 EP - 18 JO - Journal of university of Anbar for Pure science مجلة جامعة الانبار للعلوم الصرفة SN - 19918941 27066703 AB - Unculturable and non sporulating fungi represent a great challenge in studying biotrophic ,endotrophic and mycorrhizal fungal groups. In this study a novel culture dependent technique complemented with PCR was used to detect and identify of unculturable fungi in soil . To develop techniques for cultivation of unculturable fungi for the purpose of expanding studies on fungal biodiversity in soil , Soil Infusion Agar (SIA) was developed . By this technique, from higher dilutions of soil five tiny colonies (less than 1mm in diameter) had grown on SIA after incubation for 1-3 months at 280C , but had not shown growth when replicated on traditional mycological media ,were selected , purified studied culturally and microscopically and identified by molecular methods . Growth of the five clones on PDA, but not Sabouraud Dextrose Agar and Czpak Dox Agar of incubation when a loopful of a colony grown after several successive subculturing on SIA was transferred to PDA. The growth on PDA has been empirically proven due to the inoculums size effect and the period of incubation at 280C. Two fungal specific primer sets (EF4F/ITS4r and EF60F/ITS4r) were used to amplify partial sequences of fungal r RNA gene included ITS sequences .The five partial sequences of the five clones were aligned through the BLASTN phylogenetic analysis against NCBI database which revealed higher identities. The blast tree showed that all clones are neighbor joined to Aspergillus ssp and Pichia sp. These results led us to consider the clones as viable but non culturable fungi (VBNC fungi) like the common phenomenon found in some bacterial species.

واجهت الفطريات غير القابلة للتنمية تحدي عند دراسة الفطريات داخلية التغذية ، حيوية التغذية وتعايشية التغذية , في هذه الدراسة تم استخدام تقنيات جديدة تعتمد على التشخيص الزرعي وتاكيدها والمستكملة مع تفاعل البلمرة المتسلسل للكشف عن الفطريات غير القابلة للتنمية وتحديدها في التربة . لتطوير تقنيات زراعة الفطريات غير القابلة للتنمية لغرض توسيع الدراسات حول التنوع الحيوي للفطريات في التربة . فقد تم تطوير اكار منقوع التربة لهذا الغرض ومن خلال هذه التقنية ومن التخفيفات الاعلى للتربة تم ملاحظة نمو خمس مستعمرات صغيرة قطرها اقل من 1ملم في وسط اكار منقوع التربة المرشح والمعقم بعد فترة حضانة من1-3 اشهر عند درجة حرارة 28م ولكنها لم تظهر نموا عند تكرارها على الاوساط الفطرية التقليدية . تم اختيارها , تنقيتها , ودراستها زرعيا ومجهريا وتشخيصها بالطرق الجزيئية .نمو خمس مستعمرات على وسط مستخلص اكار التربة وليس على وسط السبرويد دكستروز اكار وجابيك دوكس اكار , لكن بعد حضنها نمت المستعمرات وبعد تكرارها عدة مرات متتالية على اكار منقوع التربة تم نقلها الى وسط مستخلص اكار البطاطا .وقد ثبت تجريبيا نمو العزلات على وسط مستخلص اكار البطاطا بسبب تاثير حجم اللقاح ومدة الحضن عند درجة حرارة 28م˚ م مما يعني ان المستعمرات حية لكن غير قابلة للتنمية ( viable but non-culturable)استخدم في هذه الدراسة برايمرين نوعيين لتفاعل البلمرة المتسلسل لتضخيم جين الفطريات rRNA و المتضمن منطقةITS) ) وتم مقارنة تتابع 5 عزلات فطرية ومطابقتها من خلال التحليل التطوري للعزلات على BLASTNومطابقتها بالقيم المحفوظة في NCBI وفق المصادر المحفوظة في بنك الجينات Gen bank.اظهرت الشجرة التطورية لجميع العزلات المجاورة انها تعود الى .Aspergillus sp. , Pichia sp, وهذه النتائج ادت بنا الى النظر في هذه العزلات واعتبارها فطريات حية لكن غير قابلة للتنمية viable but non-culturable)) ,مشابهه للظاهرة الشائعة التي وجدت في بعض انواع البكتيريا . ER -