TY - JOUR ID - TI - Isolation and Purification of Lipoxygenase from the Serum of Bronchial Asthma Patient and Studying the Effect of Natural Products of Horse Tail ( Equisetum arvense.L) Plant on it's Activity عزل و تنقية انزيم اللايبواوكسيجينيز جزئيا من مصل دم مريض مصاب بالربو القصبي و دراسة تأثير النواتج الطبيعية لنبات ذنب الخيل (Equisetum arvense.L) على فعاليته AU - Hiba R. Kamal هبه رافد كمال AU - Mohammed B. Hasan محمد بحري حسن PY - 2019 VL - 28 IS - 4 A SP - 76 EP - 93 JO - Rafidain journal of science مجلة علوم الرافدين SN - 16089391 AB - This study includes the isolation and purification of the Lipoxygenase (LOX) enzyme from the serum of an Asthma patient by using different techniques. The result showed the Ion – Exchange chromatography which occurred in the column containing the ion exchange (DEAE- cellulose) diethylamino ethyl – cellulose of the proteinous precipitateth which is produced after dialysis. Two bands of protein and the first band (A) showed the highest activity of the enzyme with the specific activity (2.68 U/mg) and the number times of the purification was (10.30) once. Then, the optimum conditions of LOX enzyme showed the highest activity which it was at the fifth minute at pH = 8 and at (40°C), substrate concentration was about (0.5 mmol/ L) and the maximum Velocity (Vmax) was (168 unit / L), the value of (Km) by using Mikael’s Menten and Linwifer – Burk plot was (0.13) and (0.14) molar respectively. In addition, the determining of the approximate molecular weight of LOX enzyme (the first protein band A) by electrical migration technology (Electrophoresis) using SDS-PAGE and molecular weight and it was (69000) Dalton. Also the study includes the isolation of th the natural products of the horse tail plant (oils) and identificated by GC (Gas-Liquid chromatography) and the flavonoids isolated and identificated by (HPLC) to study their effect on the activity of the partially purified enzyme, the results showed that oils contain an Undecanoic and Lauric acid, while flavonoids contain Catechine, Qurectine, Ferulic acid and Rutin, and it’s effect on the activity of partially purified enzyme showed that flavonoids reduced high-volume lipoxygenase enzyme and then sabonin followed by oils.

تتضمن الدراسة عزل وتنقية انزيم اللايبواوكسيجينيز (LOX) Lipoxygenase من مصل دم لشخص مصاب بالربو القصبي باستخدام التقنيات المختلفة و اظهرت نتائج كروموتوكرافيا التبادل الايوني التي اجريت في عمود الفصل الحاوي على المبادل الايوني (DEAE - سيليلوز) للراسب البروتيني الناتج بعد عملية الديلزة على اثنين من الحزم البروتينية، و ان الحزمة البروتينية الاولى A أظهرت أعلى فعالية للإنزيم اذ بلغت الفعالية النوعية (U/mg 2.68) و عدد مرات التنقية (10.30) مرة، ثم حددت الظروف المثلى لفعالية الانزيم وبينت النتائج ان اعلى فعالية كانت عند الدقيقة الخامسة، دالة حامضية عند (pH8)، درجة الحرارة (40°م)، تركيز(0.5 ملي مول/ لتر) للمادة الاساس (حامض اللينوليك) و أن السرعة القصوى (Vmax) بلغت(168 وحدة / لتر) وان قيمة (Km) بتطبيق معادلة ميكيلس منتن ومعادلة لاينويفر_بيرك بلغت (0.13) و (0.14) ملي مولاري على التوالي، بالإضافة الى تحديد الوزن الجزيئي التقريبي (الحزمة البروتينية الاولى A) بتقنية الهجرة الكهربائية باستخدام SDS-PAGE والذي بلغ (69000) دالتون تقريبا. كذلك تضمنت الدراسة عزل النواتج الطبيعية لنبات ذنب الخيل (الزيوت) وتشخيصها بتقنية GC (كروموتوكرافيا الغاز-سائل) و عزل (الفلافونويدات) وتشخيصها بتقنية HPLC لدراسة تأثيرها على فعالية الانزيم المنقى جزئيا، واظهرت النتائج بان الزيوت تحتوي على حامض الاندوكانويك Undecanoic و حامض اللوريك Lauric، وتحتوي الفلافونويدات على الكاتشينCatechine ، كيورسيتين Qurectine، حامض الفيروليك Ferulic acid و الروتين Rutin، اما تأثيرها على فعالية الانزيم المنقى جزئيا اظهرت بأن الفلافونويدات خفضت وثبطت انزيم اللايبواوكسيجينيز بنسبة عالية و من ثم الصابونين و تليها الزيوت. ER -