@Article{, title={Different vectors used to transform and clone of nonstructural NS1 gene of Influenza B in Escherichia coli استخدام ناقلات مختلفة لنقل واستنساخ الجين غير التركيبي NS1 لفيروس الإنفلونزا ب في بكتريا الايشريكية القولونية}, author={A.A. Dawood علي عادل داؤد}, journal={Iraqi Journal of Veterinary Sciences المجلة العراقية للعلوم البيطرية}, volume={33}, number={2}, pages={329-333}, year={2019}, abstract={Flu is a highly contagious and common illness caused by influenza A, B, and C viruses. The aim of the present study was to investigate the transformation and cloning of NS1B gene with pET-32a, pET-32b and pQE-81L in Escherichia coli BL21(DE3) and DH5α. pUC57-NS1B synthetic gene was transform and clone in Escherichia coli BL21(DE3). Isolation, single digestion and ligation with pET-32b using HindIII restriction enzyme. Amplification of recombinant DNA was done with conventional PCR after transformation. Screening with IPTG of colonies. Gel electrophoresis was done for each step of cloning after isolation. Isolation, double digestion and ligation with pET-32a and pQE-81L using SacI, PstI and HindIII respectively. Recombinant DNA was attempted to be transformed into E. coli strains BL21 (DE3) and DH5α. pUC57 plasmid carrying NS1B gene was successful transformed and isolated from E. coli BL21 (DE3). Designed primers used for PCR of NS1B showed successful amplification. First screening of pET-32b-NS1B colonies using white/blue method, cloning NS1B into pET-32b using single restriction digestion with HindIII, pET-32a using double restriction digestion with SacI and HindIII and pQE-81L using double restriction digestion with PstI and HindIII gave unexpected result. This result may relate to re-ligation of digested vector for single digestion and uncompleted digestion for vectors of double restriction digestion. Current study has suggested that recombinant NS1B gene can be cloned using single digestion with other expression vectors.

يعتبر مرض الأنفلونزا مرضًا شائعًا ومُعدٍ بسبب فيروسات الأنفلونزا نوع أ و ب و سي. كان الهدف من هذه الدراسة هو البحث في تحويل واستنساخ الجين الغير تركيبي NS1B مع النواقل pET-32a، و pET-32b و pQE-81L في بكتريا الايشريكية القولونية نوع BL21 DE3 و DH5α. تم نقل الجين الغير تركيبي مع حامله pUC57-NS1B الاصطناعي وتم استنساخه في بكتريا الايشريكية القولونية نوع BL21 DE3. تم عزل وقطع الجين بإنزيم واحد وربطه مع الحامل pET-32b باستخدام أنزيم تقييد HindIII. تم إجراء تضخيم الحمض النووي المؤتلف باستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل PCR التقليدي بعد النقل. تم الفحص باستخدام IPTG للمستعمرات البكتيرية. تمت عملية الترحيل الكهربائي للهلام لكل خطوة من خطوات عملية الاستنساخ بعد العزل. تم عزل وهضم الجين وربطه مع النواقل pET-32a و pQE-81L باستخدام أنزيمات التقييد SacI، PstI و HindIII على التوالي. تم محاولة ربط ونقل الحمض النووي المؤتلف إلى سلالات بكتريا الايشريكية القولونية نوع BL21 (DE3) و DH5α. تم تنقل البلازميد pUC57 الحامل للجين الغير تركيبي NS1B وعزله بنجاح في بكتريا الايشريكية القولونية نوع BL21 (DE3). وأظهرت البادءات المصممة المستخدمة لتفاعلات البلمرة المتسلسل PCR في تضخيم الجين الغير تركيبي NS1B نجاحا. أول كشف لمستعمرات البكتريا الحاملة ل pET-32b-NS1B باستخدام طريقة الأبيض / الأزرق. استنساخ الجين الغير تركيبي NS1B وربطه مع الناقل pET-32b باستخدام هضم الإنزيم المقيد الأحادي نوع HindIII، ومع الناقل pET-32a باستخدام عملية الهضم المزدوج باستخدام إنزيمي التقييد SacI و HindIII ومع الناقل pQE-81L باستخدام عملية الهضم المزدوج مع إنزيمي القطع PstI و HindIII أعطت نتيجة غير متوقعة. قد ترتبط هذه النتيجة بإعادة ربط الناقل على نقسه المهضوم بانزيم التقييد الاحادي والهضم غير المكتمل للنواقل ذات الهضم المزدوج. اقترحت الدراسة الحالية أنه يمكن استنساخ الجين الغير تركيبي NS1B المؤتلف باستخدام الهضم المفرد مع نواقل التعبير الأخرى.} }