TY - JOUR ID - TI - Detection of toxigenic Vibrio cholerae by PCR الكشف عن بكتريا ضمات الكوليرا المنتجة للسموم باستخدام الـPCR AU - Mohammod M. farhan محمد محمود فرحان AU - Kifah, A. Jasim كفاح احمد جاسم AU - Bilal Kamil Sulaiman بلال كامل سليمان AU - Majeed Arsheed Sabbah مجيد ارشيد سباح PY - 2011 VL - 5 IS - 1 SP - 18 EP - 21 JO - Journal of Biotechnology Research Center مجلة مركز بحوث التقنيات الاحيائية SN - 18151140 27081370 AB - holera toxin (CT) is a major virulence factor of V. cholerae causing water diarrhea. The detection of CT-producing V. cholerae using conventional culture-, biochemical- and immunological-based assays is time-consuming, laborious, and requiring more than three days perform. In this work a specific primers for ctxB gene were used for detection of V. cholera in water samples. Few colonies of V. cholera were suspended in water and used as a template in PCR reaction for the detection of ctxB gene. The 391-bp sequence of a gene that codes for the cholera toxin B subunit was amplified by PCR. Direct use of V. cholerae pure culture for PCR replaces the need for DNA extraction or boiling. Increase the concentration of MgCl2 enhances the efficiency of amplification. The specificity of the assay was determined to be specific for V. cholerae but not for, vibrio related bacteria, E. coli, Non-Agglutinable (NAG) V. cholerae, and Aeromonas sp.

يعتبر ذيفان الكوليرا من اهم عوامل الضراوة لبكتريا الكوليرا المسببة للاسهال المائي . ولان الكشف الروتيني عن بكتريا الكوليرا المنتجة للذيفان والمتضمن زراعة البكتريا على الوسط الزرعي واجراء الاختبارات المناعية والكيموحيوية تستهلك جهدا ووقتا يتعدى ثلاثة ايام . تم في هذا البحث تصميم بادئات خاصة لجين ctxB لغرض الكشف عن بكتريا الكوليرا في النماذج المائية . علقت عدد من مستعمرات بكتريا الكوليرا في الماء لغرض استخدامها في فحص التفاعل السلسلي المتضاعف لمعرفة امكانية استخدام هذا الفحص في الكشف عن وجود الجين ctxB . وتم تضخيم تسلسل ضمن الجين المسؤول عن جزء من الذيفان وهو بيتا والذي يبلغ حجمه 391 زوج قاعدي . ان استخدام الخلايا البكتيرية النقية مباشرة بالفحص قد اغنى عن استخلاص الدنا او الغليان . لوحظ ان اضافة كمية اضافية من الملح MgCl2 حسن من اداء الفحص . تم التاكد من خصوصية الفحص من خلال اعطائه نتيجة موجبة لبكتريا الكوليرا المنتجة للذيفان وسالبة لبكتريا قريبة من بكتريا الكوليرا وهي بكتريا القولون وبكتريا الكوليرا غير المنتجة للذيفان وبكتريا الايروموناس . ER -