TY - JOUR ID - TI - Evaluation of PCR, ELISA, and Culture Methods for the Diagnosis of Animal Brucellosis . تقييم كفاءة اختباراتPCR , الاليزا والزرع الجرثومي في تشخيص داء البروسيلات في الحيوانات AU - Sahar A. Al-Bayatti* سحر احمد البياتي AU - Amina N. Al-Thwani** آمنه نعمه الثويني** PY - 2009 VL - 1 IS - 1 SP - 1 EP - 17 JO - Diyala Agricultural Sciences Journal مجلة ديالى للعلوم الزراعية SN - 20739524 23108746 AB - The present study was undertaken to evaluate polymerase chain reaction (PCR) technique in the diagnosis of brucellosis in comparison with the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and microbiological culture techniques in animal’s blood and aborted fetuses. Thirty animal blood samples were used 20 of them were rose bengal plate test (RBPT) positive and which were subdivided into two groups (11) vaccinated and (9) not-vaccinated, and 10 negative controls. ِAll these samples were examined by PCR using primer pair to amplify a 223-bp region within a gene coding for 31-kDa Brucella antigen, ELISA and culture. Five aborted fetuses were also included in this study these were examined by PCR using the same mentioned pair of primers and culture only. The results of the 20 RBPT +ve blood samples revealed that 13 and 7 were also positive by PCR and ELISA representing 65% and 35% sensitivity, none was positive by culture. There was no positive case among the control group by all the tests which included in this study so its specificity were 100%. The overall agreement between PCR and ELISA and PCR and culture were 73.33% and 56.66% respectively. From the five aborted fetuses which included in this study 4 were positive for Brucella infection by PCR and 3 of the 4 were also positive by culture, one was negative by both. The overall agreement between PCR and culture was high and reached 80%. On the basis of biochemical characteristics results the two isolates which were from sheep fetuses were Brucella melitensis and one Brucella abortus isolates from aborted buffalo fetus. Due to many advantages, like speed, safety, high sensitivity and specificity, PCR is recommended to use in the diagnosis of animal brucellosis but its results need more evaluation in the vaccinated animal.

استهدفت الدراسة الحالية تقييم الفحص المعتمد على تقنية PCR (polymerase chain reaction) بالمقارنة مع كل من فحصي الاليزا (enzyme linked immunosorbant assay) والزرع الجرثومي في تشخيص داء البروسيلا في دم الحيوانات واجنتها المجهضه.تم أستخدام 30 عينة دم لحيوانات منها 20 موجبه لفحص الروزبنكال[RBPT+ve))Rose Bengal Plate Test ] والتي بدورها تم تقسيمها الى مجموعتين الأولى ملقحه بعدد(11) والثانيه غيرملقحه بعدد(9) و 10 سيطرة سالبه للفحص المذكور.كل هذه العينات تم فحصها باللأليزا والPCR باستخدام زوج البادئات المخصص بمضاعفة جين بوزن 223 زوج قاعدي مشفرلمستضد البروسيلا ذو وزن 31 كيلودالتون كما تم أستخدام 5اجنة مجهضة اختبرت بالـ PCR وباستخدام نفس البادئات المشار اليها والزرع الجرثومي فقط.تم تأكيد الأصابة بالبروسيلا في عينات دم الحيوانات العشرين والتي كانت موجبة لفحص الروزبنكال في 13 حسب اختبارPCR و7 حسب أختبار الأليزا وهي بهذا تمثل نسب حساسية بلغت %65 و %35على التوالي. لم يتم الحصول على اي عزل جرثومي من هذه العينات. كما ان الأختبارات الثلاثة كانت سالبة في جميع افراد مجموعة السيطرة بهذا تكون الخصوصية لكل منهم .%100 نسبة التوافق الكلية بين PCR والأليزا و PCR والزرع الجرثومي بلغت 73.33% و %56.66 على التوالي.خمسة اجنة مجهضة تم شمولها في هذه الدراسة , اربعة منها اظهرت نتيجة موجبة لفحص PCR وثلاثة من هذه الأربعة كانت ايضا موجبة للزرع الجرثومي. واحدة كانت سالبة لكلا الاختبارين. نسبة التوافق الكلية بين PCR والزرع الجرثومي كانت الأعلى وقد بلغت 80% . على اساس نتائج الأختبارات البايوكيميائية, العزلتين اللتين تم الحصول عليهما من اجنة الأغنام المجهضة كانتا من نوع Brucella melitensis بينما العزلة التي تم الحصول عليها من جنين الجاموس كانت من نوع Brucella abortus . بلنظر للفوائد العديده للPCR والمتمثله في السرعه والامان والحساسيه والخصوصيه العاليتين نوصي باستخدامه في التشخيص. الاان قدرته على تمييز الحيوانات المصابه من الملقحه غير دقيقه وتحتاج مزيد من الدراسه. ER -