TY - JOUR ID - TI - Separation and Study of some Kinetic Properties of Senescence Marker Protein -30 in Human Plasma فصل ودراسة بعض الصفات الحركية لبروتين علامة الشيخوخة- 30 من بلازما الإنسان AU - Luay A. Al-Helaly لؤي عبد الهلالي AU - Maryam A. Saleh مريم عبد الخالق صالح PY - 2012 VL - 23 IS - 4A SP - 137 EP - 157 JO - Rafidain journal of science مجلة علوم الرافدين SN - 16089391 AB - The research includes the isolation of senescence marker protein-30 (SMP-30) from human plasma of normal young male age 25 year, the factors affecting the activity of the enzyme and determination of its molecular weight. One band had been isolated by gel filtration chromatography from the proteinous supernatant produced by precipitation by ammonium sulfate (60%) after dialysis and separation by cooling centrifuge. Apparent molecular weight of the isolated enzyme using gel filtration chromatography was (34672) Dalton.The results also showed that the optimum conditions of SMP-30 were obtained at (100 µg/ml) of enzyme concentration and phosphate buffer (0.022 mol/l) as a buffer at pH (8) for (18) minutes at (49C) using (14 mmol/l) of gluconolactone (GL) as a substrate,. Using Line Weaver–Burk plot, the values of maximum velocity (Vmax) and Michaelis constant (Km) were (0.65 µmol/ min) and (5.6 mmol/l) respectively. Beside of, the study showed the effect of some chemicals and drugs inhibitors on the enzyme activity, Phenyl phrine, neomycin and mercuric chloride possessed a noncompetitive inhibition and caffein anhydrous possessed a competitive inhibition and arsenate meta sodium possessed a uncompetitive.

تم عزل بروتين علامة الشيخوخة-30 من البلازما لشخص سليم بعمر 25 سنة، كما تمت دراسة بعض العوامل المؤثرة على فعاليته بوصفه إنزيماً فضلا عن تحديد وزنه الجزيئي. إذ تم فصل حزمة رئيسة واحدة فقط ذات فعالية عالية بتقنية الترشيح الهلامي للراسب البروتيني الناتج عن ترسيب بروتينات البلازما بكبريتات الامونيوم (60%) بعد عملية الفرز الغشائي (الديلزة) وفصله بالطرد المركزي المبرد، واستخدمت فيما بعد الحزمة لدراستها وتحديد الوزن الجزيئي لمكوناتها باستخدام تقنية الترشيح الهلامي وكانت بحدود 34672 دالتون.أظهرت الدراسة ان الظروف المثلى لعمل الإنزيم (SMP-30) كانت عند تركيز (100 مايكروغرام/مل) باستخدام المحلول المنظم الفوسفات بتركيز (0.022 مول/لتر) عند أس هيدروجيني(8) وزمن التفاعل (18 دقيقة) ودرجة حرارة (49°م) باستخدام تركيز (14 ملي مول/لتر) من مادة الأساس كلوكونولاكتون، وباستخدام رسم لاين ويفر– برك تم إيجاد قيمة السرعة القصوى (Vmax) وثابت مكيلس (Km) وكانت مساوية لـ (0.65 مايكرومول/دقيقة) و (5.6 ملي مول/لتر) على التوالي. فضلا عن ذلك درس التأثير التثبيطي للعديد من المركبات الكيميائية والدوائية على فعالية الإنزيم, وبينت النتائج أن التأثير التثبيطي لمركبات فينايل فرين وكلوريد الزئبق والنيومايسين كان من النوع غير التنافسي والكافيين كان من النوع التنافسي اما طبيعة تثبيط الزرنيخ ميتا الصوديوم فكان من نوع اللاتنافسي . ER -