@Article{, title={DETERMINATION GENETIC FACTORS CONTROLLING Β-LACTEMASE ENZYME RELATED TO BLA TEM AND BLA SHV FAMILIES USING THE POLYMERASE CHAIN REACTION تحديد العوامل الوراثية المسيطرة على إنتاج أنزيم البيتا لاكتاميز من عائلتي bla TEMوbla SHV بإستعمال التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا}, author={Sawsan S. Al-Jubori}, journal={Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية}, volume={11}, number={2}, pages={377-388}, year={2012}, abstract={Clinical isolates (75) of Gram- negative bacteria were isolated from patients with different infections at Al-Kadhumia Educational hospital in Baghdad. These isolates were diagnosed using different morphological and biochemical test followed by the complementary api 20E and api 20NE test. They were distributed as Escherichia coli, Proteus mirabilis and Pseudomonas aeruginosa (25 isolates for each). β-lactemase production was investigated using the rapid iodometric method and the results revealed that 48 isolates out of 75(64%) gave a positive result .These isolates were, 21 from E.coli (84%),17 isolates for P. mirabilis (68%) and 10 of Ps. aeruginosa(40%).The double disc approximation test was used to detect Extended spectrum β-lactemases (ESBLs)and the result showed that 28 isolates out of 48(58.33%)gave positive result as 19,3,6 isolates for E. coli, P. mirabilis and Ps. aeruginosa respectively. Polymerase chain reaction(PCR) technique was performed to detect the genetic factors controlling β-lactemases related to bla TEM and bla SHV families and template DNA was prepared either by the boiling method in which the total genomic DNA will serve as a template or by using the plasmid DNA as a template and the later was prepared by the alkaline lysis method. Results of using total genomic DNA showed that 27 isolates out of 28(96.42)were harboring bla TEM gene based on the presence of 950 bp bands in 1% agarose gel .By using the plasmid DNA as a template ,only 10 isolates (35.7%) gave clear band which may indicate that β-lactemases of these isolates may be are plasmid mediated .For bla SHV gene , the results of using the first template showed that only 2 E. coli isolates out of 28(4.14%)gave a positive result represented by presence of 800 bp band in the agarose gel while no band was observed when the plasmid template was used which may indicate that the enzymes here under chromosomal control.

عزلت 75 عزلة سريرية من إصابات مختلفة لمرضى من مستشفى الكاظمية التعليمي في بغداد. شُخصت العزلات إعتماداً على عدد من الفحوصات المظهرية والبايوكيمياوية المتبوع بالتشخيص التكميلي بعدتيE api 20NE, api 20. توزعت العزلات ما بينEscherichia coli,Proteus mirabilis and Pseudomonas aeruginosa بواقع 25 عزلة لكل منها. تم التحري عن إنتاج انزيم البيتا لاكتاميز بإستعمال طريقة اليود القياسية ,واظهرت النتائج ان48 عزلة من مجموع 75(64%) قد أعطت نتيجة موجبة. توزعت هذه العزلات بواقع 21عزلة E.coli (%84) و17عزلة P.mirabilis (%68) و10( (%40لبكتريا Ps.aeruginosa. إستعملت طريقة الأقراص المتاخمة للكشف عن انزيمات البيتا لاكتاميز واسعة الطيف ,واظهرت النتائج ان هنالك 28عزلة موجبة من مجموع 48(58.33%) بواقع 19و3و6 عزلات لكل من E.coli و P.mirabilisو Ps.aeruginosaعلى التوالي. إستعملت تقنية التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا للتحري عن العوامل الوراثية المسيطرة على إنتاج إنزيم البيتا لاكتاميز من عائلتي bla TEM و bla SHVاذ حضر قالب الدنا بطريقتين الاولى بطريقة الغليان وهنا إستعمل الدنا الكلي للبكتريا كقالب او بإستعمال الدنا البلازميدي كقالب إذ حضر الأخير بطريقة التحلل القاعدي. بينت نتائج إستعمال الدنا الكلي كقالب إن هنالك 27 عزلة من أصل 28(96.71%) كانت تحوي جين bla TEMوإعتماداً على ظهور حزمة بحجم 950 زوج قاعدة في هلام 1% اجاروز. أما عند إستعمال البلازميدات كقالب فقد ظهرت حزم واضحة الى 10عزلات فقط (35.7%) مما قد يعطي إنطباعاً كون الصفة هنا بلازميدية. فيما يخص جين bla SHV فلقد ظهر من النتائج إعطاء عزلتين فقط من ) E.coli (4.14%النتيجة الموجبة بإعتماد طريقة الغليان في تحضير القالب, وبحجم 800 زوج قاعدة عند الترحيل بهلام 1% اجاروز في حين لم تظهر اي حزمة بإستعمال البلازميدات كقالب مما يدل إنها الصفة هنا قد تكون كروموسومية المنشأ.} }