TY - JOUR ID - TI - Partial Purification and Estimated some Characterization of protease from prickly lettuce (Lactuca serriola L.) leaves and used it in some applications تنقية أنزيم البروتييز جزئيا من أوراق نبات الخس الشوكي (Lactuca serriola L.) وتحديد بعض صفاته واستعماله في بعض التطبيقات العملية AU - Mohammed. A. Al-Soufi PY - 2013 VL - 12 IS - 2 SP - 1 EP - 18 JO - Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية SN - 18154794 25207245 AB - Abstract: Acetone powder was used to extracted protease from (Lactuca serriola L.) Prickly lettuce leaves. Enzyme content of crude extract was concentrated by gradual addition of ammonium sulfate at 40-80% saturation, then partial purification of gel filtration chromatography by sephacryl S-200. The enzyme specific activity, purification fold and yield were 51.37 unit/mg, 6.30 and 77.55 respectively. The molecular weight was 31000 Dalton as determined by gel filtration. The results were showed that optimum pH of the purified enzyme by used casein as a substrate was 8.5 while the enzyme was stable at a wide range of pH that between 4-10. The optimum temperature for enzyme activity was 60ºC and the enzyme was stable at 55ºC for 30 min. The results refer to increase in enzyme activity when treated with Mg, Ca and Zn 114.09, 128.63 and 118.43 respectively while treatment with Co and Hg lead to lose near 50 and 95% from enzyme relative activity, but these activity was not high affected when using all of phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF), Pepstatin and Ethylene Diamine Tetra Acetic acid (EDTA) that 94.37, 96.27 and 91.93 respectively, while the enzyme relative activity was 105.37 when used β-mercaptoethanol, but used Iodoacetic acid lead to get 22.76% form original enzyme activity. The chemical enzyme modification by using Polyethylene glycol (PEG) that activated with Cyanuric chloride (CC) lead to increased of enzyme relative activity alkaline pH value and high temperature degree. The results of application study refer to the ability to use protease in dehairing from cow skin after soaked for 24 hours, and when enzyme was used with commercials detergents. It was noticed that the non modified enzyme had (89, 84, 82, 76 , 69%) from its original activity, while the modified enzyme at 72% had (94, 86, 85, 82, 76 , 74%) from its original activity after incubation at 50ºC for 30 minutes with commercial detergents like Persil, Bonux, Ariel, Tide and Alwazir respectively.

الخلاصة:استعمل مسحوق الأسيتون لتحضير مستخلص انزيم البروتييز من اوراق نبات الخس الشوكي Prickly lettuce (Lactuca serriola L.)، وجرى تركيز الأنزيم باستعمال ملح كبريتات الأمونيوم بنسب إشباع مقدارها 80-40% تلاها تنقية الأنزيم جزئيا باستعمال الترشيح الهلامي بمادة Sephacryl S-200 للحصول على الأنزيم بفعالية نوعية 51.37 وحدة/ملغم وعدد مرات تنقية 6.30 مرة وحصيلة مقدارها 77.55% وبلغ الوزن الجزيئي للأنزيم المنقى 31000 دالتون عند تقديره بوساطة الترشيح الهلامي، وأظهرت النتائج أن الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية الأنزيم المنقى التحللية باستعمال الكازئين كمادة أساس بلغ 8.5 بينما كان الأنزيم ثابتاً في مدى واسع من قيم الارقام الهيدروجينية تتراوح بين 10-4 وبلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية الأنزيم 60م وكان الأنزيم ثابتا بدرجة حرارة 55م لمدة 30 دقيقة وبينت النتائج حصول زيادة في الفعالية الانزيمية بوجود كلا من ايونات المغنيسيوم والكالسيوم والزنك والتي كانت 114.09 و 128.63 و 118.43% على التوالي في حين ادى وجود الكوبالت والزئبق الى خسارة ما يقارب 50 و 95% من الفعالية الانزيمية على التوالي. كما لوحظ بأن الفعالية المتبقية لم تتأثر كثيرا عند استعمال كلا من (PMSF)phenylmethylsulfonyl fluoride و Pepstatin و (EDTA) Ethylene Diamine Tetra Acetic acid التي كانت 94.37 و 96.27 و 91.93% على التوالي وعند استعمال Iodoacetic acidلوحظ وجود تثبيط عالـي إذ بلغت الفعالية المتبقية 22.76% بينما كانت الفعــاليـة الــمتبقيـة 10.537% عنــــــــد استعمـــــال β-mercaptoethanol وساهم التحوير الكيميائي للأنزيم المنقى باستعمال (PEG) Polyethylene glycol المنشط بمادة (CC) Cyanuric chlorideفي رفع درجة الفعالية المتبقية للأنزيم عند قيم الاس الهيدروجيني القاعدية ودرجات الحرارة المرتفعة وبينت نتائج التطبيقات العملية إمكانية استعمال الأنزيم في إزالة الشعر من جلد البقر بشكل كامل بعد النقع لمدة 24 ساعة وعند استعمال الأنزيم مع مساحيق التنظيف التجارية لوحظ بأن الأنزيم غير المحور احتفظ بـ 89 و 84 و 82 و 76 و 69% من فعاليته الأصلية بينما احتفظ الأنزيم المحور بدرجة 72% بـ 94 و 86 و 85 و 79 و 74% من فعاليته الأصلية عند حضنهما بدرجة حرارة 50م لمدة 30 دقيقة مع كل من المنظفات Persil و Bonux و Ariel و Tide و Alwazirعلى التوالي. ER -