TY - JOUR ID - TI - Extraction and Partial Purification of UCA Fimbriae from Proteus mirabilis and Study Their Role in Adhesion to Uroepithlial Cells الاستخلاص والتنقية الجزئية لخملة UCA من بكتريا Proteus mirabilis ودراسة دورها في الالتصاق على الخلايا الطلائية البولية AU - May T. Flayyih and Amir S. Ali مـي طالب فليح و عامر سعيد علي PY - 2014 VL - 32 IS - 2B micro conf SP - 51 EP - 74 JO - Basrah Journal of Science (Bas J Sci) مجلة البصرة للعلوم SN - 26648288 26648296 AB - From 211 urine samples, Gram negative bacteria were isolated from only 61 urine samples with isolation percentage 28.9%. Escherichia coli were isolated percentage 70.49% while Klebsiella pneumoniae and Psendomonas aeruginosa were 8.19% and 6.55%, respectively.Proteus spp. Were isolated from 9 (14.75%), P. mirablis and P. vulgaris were isolates percentage 11.47% and 3.27%, respectively.Uroepithelial Cell Adhesin (UCA) fimbriae expression by P.mirabilis isolates was detected by the high capacity to adhesion to human uroepithetial cells, the isolate p.mirabilis U7 was adhesion to human uroepithelial cells mean no.30.2 bacteria/cell when grown on luria broth at 37C for 24h, but then grown it’s on luria agar at 37C for 24h the adhesion mean no. was 20.3 bacteria/cell. P.mirabilis U4 the adhesion mean no.4.7% and 1.65% when grown on luria broth and luria agar at 37C for 24h, respectively. MR/P and MR/K fimbriae was induced by growth on luria broth at 37C for 48h and reduced by growth on agar media.UCA fimbriae were isolated and partially purified by using 2 molar urea, heat shock, saturated ammonium sulphate 50% and deoxycholate, yielded 1.65 g/ml. SDS.PAGE of partially purified UCA-fimbriae after ammonium sulfate precipitation showed 6 protein containing bands, for 5 bands (molecular weight 17782 Dalton) represented UCA-fimbriae.

عزلت البكتريا السالبة لملون كرام من 61 عينة أدرار وبنسبة عزل 28,9% من أصل 211 عينة أدرار , كانت نسبة عزل بكتريا Escherichia coli 70,49% , أما بكتريا Klebsiella pneumoniae , و Pseudomonas aeruginosa فكانت نسبـة عزلهمـا 19¸8% و 6,55% وعلى التوالي .أظهرت بكتريا Proteus spp. نسبة عزل 14,75% وبلغت نسبة عزل P.mirabilis 11,47% أما نسبة عزل P.vulgaris فكانت 3,27% .تم التحري عن قدرة سلالات بكتريا P.mirabilis للتعبير عن خمل لاصق الخلايا الطلائية البولية (Uroepithelial Cell Adhesin) (UCA) , بالاعتماد على أعلى معدل التصاق للبكتريا بالخلايا الطلائية البولية للانسان , أذ تم أختبار العزلة P.mirabilis U7 التي كان معدل ألتصاقها 30,2% عند تنميتها على وسط مرق اللوريا وفترة حضن 24 ساعة بدرجة حرارة 37 م , وعند تنميتها على وسط أكار اللوريا كان معدل التصاقها 20,3% مقارنة بالعزلة P.mirabilis U4 التي أبدت معدل التصاق واطيء عند تنميتها على وسط مرق اللوريا وأكار اللوريا أذ بلغ معدل الالتصاق 4,7% و 1,65% وعلى التوالي أظهرت العزلة P.mirabilis U7 قدرة للتعبير عن الخمل المقاوم للمانوز شبيه البروتيس (MR ∕P) والخمل المقاوم للمانوز شبيه الكلبسيلا (MR ∕K) أختزل التعبير عن الخمل MR ∕Pو MR ∕K عند تنمية P.mirabilis U7 على الاوساط الزرعية الصلبة .عزل خمل UCA ونقي جزئياً بأستخدام اليوريا بتركيز 2 مولر و الصدمة الحرارية وكبريتات الامونيوم بنسبة تشبع 50% و أملاح Deoxycholate , كان تركيز بروتين UCA هو 1,65 مايكروغرام/مليلتر.أظهر الترحيل الكهربائي وبوجود المادة الماسخة SDS وبعد الترسيب بكبريتات الامونيوم ظهرت 6 حزم، الحزمة 5 تمثل بروتين UCA المنقى جزئيا والذي بلغ وزنه الجزيئي 17782 دالتون. ER -