Fulltext

تنقية وتوصيف أنزيم الأنيولينيز من الفطر Aspergillus niger المعزول محليا

علي عبد الكاظم --- ناجح هاشم كاظم --- أم البشر حميد جابر

Journal of University of Babylon مجلة جامعة بابل
ISSN: 19920652 23128135 Year: 2016 Volume: 24 Issue: 8 Pages: 2221-2238
Publisher: Babylon University جامعة بابل

Abstract

Inulinase from A. niger local isolate was purified.The purification steps included precipitation with ethanol 70% ,Ion exchange chromatography with DEAE-cellulose and finaly ,gel filteration (two steps) using Sephadex G-150.Two forms of inulinase (W and A) were obtained from the purification procedure used. Inulinase forms were purified with (6.8 and 9.4) fold and (9 and 13.5) % yield , respectively. Electrophoresis results confirmed the complete purity to the two enzyme forms since they gave a single band in polyacrylamide gel electrophoresis.Enzyme characterization revealed that the molecular weight of the W and A forms were 72.4 and 69.18 ,respectively. The optimum pH activity was 4.5 for both enzyme forms . The W form was stable within the range (3.5-7.0) while the A form was stable within the pH (4.5- 9.0). The W form was stable with in temperature range (20-45) Cᵒ while the A form was stable within the range (20-50) Cᵒ. Km value were (1.052 and 0.909) mM and V max values were (2.86 and 5) µM/ml/min for both enzyme forms W and A , respectively .

تم تنقية انزيم الانيولينيز من عزلة محلية من الفطر Aspergillus niger واشتملت خطوات التنقية على الترسيب بالكحول الاثيلي %70 فالتبادل الايوني بأستخدام المبادل DEAE-cellulose وأخيرا الترشيح الهلامي مرتين بأستخدام الهلام Sephadex-G-150واسفرت عملية التنقية عن الحصول على على صورتين لأنزيم الانيولينيز(W وA) وبلغ عدد مرات التنقية (6.8 و9.4) مرة والحصيلة الانزيمية (9 و13.5)% لكل من صورتي الأنزيم W وA ,على التوالي. اثبتت نتائج الترحيل الكهربائي ظهورحزمة واحدة لكل من صورتي الانزيم مما يؤكد نقاوتهما بشكل تام.اما نتائج توصيف الانزيم فقد اوضحت ان الوزن الجزيئي لصورة الانزيم W قد بلغ 72.4 بينما بلغ 69.18 لصورة الانزيم A .وكان الرقم الهيدروجيني 4.5 هوالامثل لفعالية كلا صورتي الانزيم, كما كانت الصورة W ثابتة بمدى من الرقم الهيدروجيني (3.5- 7) بينما كانت الصورة A ثابتة بمدى رقم هيدروجيني (4.5-9 ).ابدت الصورة W ثباتا حراريا بمدى (20-45) مᵒ في حين ابدت الصورة A ثباتا بمدى(20-50) مᵒ. وبلغت قيم ثابت ميكالس(1.052 و0.909) ملي مولر والسرعة القصوى (2.86 و5) مايكرومول /مليليتر/ دقيقة لصورتي الأنزيم WوA, على التوالي بأستخدام الانيولين كمادة تفاعل .

Keywords

Inulinase --- DEAE- cellulose --- Gel filteration --- Enzyme kinetics --- Enzyme thermal stability --- انزيم الانيولينيز ، المبادل DEAE-cellulose ، الترشيح الهلامي ، الثوابت الحركية ، الثبات الحراري للانزيم.