Fulltext

التشخيص الجزيئي لطفيلي الاميبا الحالة للنسيج في منطقة الفرات الاوسط

صبا فاضل علي --- علي حسين مكي

Journal of University of Babylon مجلة جامعة بابل
ISSN: 19920652 23128135 Year: 2017 Volume: 25 Issue: 1 Pages: 57-68
Publisher: Babylon University جامعة بابل

Abstract

This study aimed to find the prevalence of E. histolytica parasite in Middle Euphrates region – Iraq, using one of the molecular methods. The study was conducted on the (1350) stool samples from diarrhea - suffering patients in three provinces of Middle Euphrates region: Karbala, Babel and Al- Najaf (450 in each province). Patients ranged in age (1 to more than 60) years and from both sexes and different regions who were attended to some hospitals, dispensaries and private laboratories in these governorates during the period from the first of May 2013 till the end of April 2014. All collected fresh samples were examined microscopically by wet-mounts method for E. histolytica detection. Around 0.5 g of each positive and some of negative stool samples in microscopic examination was preserved at -20Cº until use in molecular study. One third of positive samples in microscopic examination (which was selected to be representative for all positive samples) from each province and five of negative one as control group were submitted to the nucleic acid (DNA) extraction. One pairs of specific primers was designed to be used for molecular diagnosis of E. histolytica using PCR technique. Primers materials were supplied by Bioneer Co. and prepared according to its instructions. Molecular diagnosis of E. histolytica were performed using PCR reaction with amplification of the 355-bp fragments from the internal transcribed spacer region1 ITS1. The PCR was conducted using Accupower® PCR Premix kit/ Bioneer as DNA polymerase and the reaction was performed in a thermocycler. The products were submitted to 1.5 % agarose gel electrophoresis, stained with ethidium bromide and the gel images were recorded under transilluminator UV light. Based on the results of this study, microscopic examination showed that the total percentages of infection with E. histolytica were (15.1, 13.3 and 16.7) % in Karbala, Babel and Al- Najaf respectively. As infection rates are close in the three provinces and the absence of vast differences between these percentages, so the three provinces were treated as one (Middle Euphrates region). For the molecular diagnosis by using PCR technique the true prevalence of E. histolytica in Middle Euphrates region was found to be %12.8.

هدفت هذه الدراسة إلى ايجاد مدى انتشار طفيلي الاميبا الحالة للنسيج في منطقة الفرات الاوسط باستخدام إحدى الطرائق الجزيئية. اجريت الدراسة على 1350 عينة غائط طرية جمعت من المرضى الذين يعانون من الإسهال في ثلاث محافظات من محافظات منطقة الدراسة ( كربلاء و بابل و النجف) و بواقع 450 عينة لكل محافظة. تراوحت أعمار المرضى بين سنة واحدة إلى أكثر من 60 سنة ومن كلا الجنسين و مختلف المناطق الوافدين على بعض المستشفيات و المستوصفات والمختبرات الخاصة في هذه المحافظات في المدة من الأول من أيار 2013 وحتى نهاية نيسان 2014. جميع عينات الغائط الطرية فحصت مجهريا بطريقة المسحة الرطبة للكشف عن الاميبا الحالة للنسيج Entamoeba histolytica. حفظ حوالي نصف غرام من العينات ذات التشخيص الموجب و بعض العينات السالبة بدرجة حرارة ( 20 - ) م لحين استخدامها في الدراسة الجزيئية. انتخب ثلث العينات الموجبة المشخصة بالفحص ألمجهري (بحيث تكون هذه العينات ممثلة لمجتمع العينات الموجبة التشخيص) مع خمسة عينات سالبة لكل محافظة كمجموعة سيطرة لغرض استخلاص المادة الوراثية ( DNA). صمم زوج من البادئات النوعية لتشخيص طفيلي الاميبا الحالة للنسيج باستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسلPCR . اعتمد التشخيص الجزيئي على نتائج تضخيم البادئات النوعية Specific primers بتقنيةPCR لمنطقة للحيز ألاستنساخي الداخلي ITS1)) الخاصة بتشخيص طفيلي الاميبا E. histolytica عند ناتج بلغ355) ) bp. حضر مزيج تفاعل البلمرة المتسلسل باستعمال عدة Accupower® PCR Premix المجهزة من قبل شركة Bioneer الكورية و تمت عملية التضخيم باستخدام جهاز المبلمر الحراري. أجريت عملية الترحيل الكهربائي باستخدام هلام الاكاروز 1.5% و صبغه بروميد الاثيديوم و صور الجل بجهاز مصور الحزم الجينية تحت الأشعة فوق البنفسجية. بالاعتماد على نتائج هذه الدراسة فان الفحص ألمجهري أظهر إن إجمالي نسب الإصابة بطفيلي الاميبا الحالة للنسيج كانت) 15.1 و 13.3 و 16.7) % في كربلاء و بابل و النجف على التوالي. و لكون نسب الخمج متقاربة في المحافظات الثلاثة و عدم وجود فروق شاسعة بين هذه النسب تم معاملة المحافظات الثلاث كمنطقة واحدة هي ( الفرات الاوسط). فيما يخص التشخيص الجزيئي بتقنية PCR تبين إن نسبة الخمج الحقيقية بطفيلي الاميبا الحالة للنسيج في منطقة الفرات الأوسط هي12.8 %.

Keywords

: E. Histolytica --- ITS1 --- molecular methods --- PCR. --- طفيلي الامبيا --- حيز الاستنساخي الداخلي، التشخيص الجزيئي --- تقنية PCR.