Fulltext

EXTRACTION AND PARTIAL PURIFICATION OF PROTEASE FROM LOCAL SERRATIA MARCESCENS

الإستخلاص والتنقیة الجزئیة لأنزیم البروتیز من العزلة المحلیة

Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية
ISSN: 18154794 Year: 2011 Volume: 10 Issue: 2 Pages: 261-272
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Abstract

ABSTRACTSerratia marcescens isolated from a patient with urinary tract infection taken fromthe Central Health Laboratory. The sensitivity test showed the resistant to theTetracyclin (30μg), Amoxicillin (25 μg), Gentamycin(30 μg), ampicillin (10μg), andKanamycin (30μg), but it was sensitive to Ciprofloxacin (5 μg) only. The extracellularprotease was extracted in LB broth and purified in two step included precipitationwith (30-55%) saturation of ammonium sulfate, dialysis and ion exchangechromatography by DEAE–Cellulose. Only one peak contained the enzymatic activity,and purification fold was 22.6 with 37.92% recovery. Based on the inhibitory effectsof EDTA, the protease was characterized as a metalloproteinase. The enzyme activitywas increased in the presence of Mg2+ and decreased in the presence of Cu2+ andZn2+. The protease could also be activated by the non-ionic surfactants Tween 80(1.0%) and Triton X-100 (1.0%).

الخلاصةمن عینة إدرار لمریض مصاب بالتهاب المجاري البولیة وشخصت من Serratia marcescens تمَ عزل بكتریاقبل مختبر الصحة المركزي. أظهر فحص الحساسیة للمضادات الحیویة بأن العزلة مقاومة للتتراسایكلین ( 30مایكروغرام) وأموكسیسیلین ( 25 مایكروغرام) وجنتامایسین ( 30 مایكروغرام) وأمبیسیلین ( 10 مایكروغرام)وكانامایسین ( 30 مایكروغرام) ولكن حساسة فقط للمضاد سیبروفلوكساسین ( 5 مایكروغرام). تم أستخلاص إنزیموتمت تنقیته بخطوتین بسیطتین تضمنت الترسیب بأستعمال سلفات الأمونیوم LB broth البروتییز في وسطأظهرت بأن قمة .DEAE – Cellulose 55 %) ودیلزة والترشیح بأستعمال المبادل الآیوني - وبنسبة أشباع( 30أظهرت EDTA واحدة كانت تحوي على فعالیة أنزیمیة وبعدد مرات تنقیة 22.6 ونتائج التأثیرات التثبیطیة بإستعمالوأن الفعالیة الأنزیمیة قد إزدادت بوجود آیونات المغنیسیوم وٕانخفضت metalloproteinase بأن الأنزیم من نوعTween بوجود آیونات الزنك والنحاس. وقد تمَ التوصل الى أن إنزیم البروتییز ممكن تنشیطه بإستعمال مادة 80.( بتركیز(% 1.0 Triton X- بتركیز(% 1.0 ) و 10

Keywords

Protease --- Serratia Marcescens --- Metalloproteinase