Fulltext

Purification of Exotoxin A from Locally Isolate of

تنقية السم الخارجي من نوع A المنتج من قبل العزلة المحلية لبكتريا

Sara K. Nafea, Subhi J. Hamza, Maha F. Majeed

Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية
ISSN: 18154794 Year: 2013 Volume: 12 Issue: 1 Pages: 68-76
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Abstract

Twenty-five isolates of Pseudomonas aeruginosa were isolated from wounds, burns, inflammation of the urinary tract(UTI), sputum and ear infections. These isolates were found producing exotoxin A as indicated by ELISA test. Isolates from different infections (burn, wounds and UTI) were selected according to their productivity. An amount of 0.045, 0.064 and 0.040 mg/ml protein which represent and 23.31, 29.73 and 19.01 ng/ml exotoxin A were produced respectively. Extoxoxin A was partially purified using precipitation by 90% ammonium sulphate followed by ion exchange chromatography with DEAE-cellulose then gel filtration chromatography by sepharose 4B was using to detection the molecular weight for the purified toxin was estimated as 65 KD.

تم إختبار 25 عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosaالمعزولة محلياً من الجروح, الحروق, التهابات المسالك البولية, القشع والتهابات الأذن. تم الكشف عن قابلية هذه العزلات على إنتاج السم الخارجي من نوع A بأستعمال نظام ELISA, وقد تم إختيار هذه العزلات من الجروح, الحروق والتهابات المسالك البولية وفقا لأنتاجيتها إذ بلغت 0.045, 0.064 و 0.040 ملغم/مل للبروتين و 29.73, 23.31 و19.01 نانوغرام/مل للسم الخارجي نوع A على التوالي. تمت التنقية للسم الخارجي بواسطة الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة إشباع90% تليها التنقية بالمبادل ألايونيDEAE-cellulose , والتنقية بالهلام من نوع Sepharose 4B وتعيين الوزن الجزيئي للسم الخارجي الذي قدر بـ 65 كيلودالتون.

Keywords

Exotoxin A --- Pseudomonas Aeruginosa --- ELISA test.