Abstract | Keywords | Fulltext | Export | TOC

The increasing resistance of staphylococci to ß -lactam antibiotics has become a major clinical problem. Development of rapid and sensitive techniques for detection of MRSA is an important aim for public health. A duplex PCR were established for specific identification of methicillin-resistance Staphylococcus aureus (MRSA) in clinical samples. In this work a duplex SYBR Green real time PCR was developed for rapid identification of MRSA in local methicillin-resistance S. aureus isolates. Twenty methicillin-resistance S. aureus isolates, as determined by disc diffusion method, were subjected to DNA extraction and PCR amplification. Two genes were amplified successfully, mecA (533bp) and femA (314bp), as targets for methicillin-resistance and specific identification of S. aureus, respectively using conventional PCR. Sensitivity of the duplex PCR showed that the minimum concentration of DNA that gave positive results for the two genes was 30ng/µl. In order to develop rapid and sensitive test for identification of MRSA, serial dilutions of purified DNA were amplified gradually according to their concentrations using SYBR Green real time PCR. These results indicated that the SYBR Green real time PCR can be used for identification of methicillin-resistance S. aureus (MRSA) in clinical

تعد صفة المقاومة لدى بكتريا الـS. aureus لمضادات البيتا لاكتام من المشاكل الطبية المنتشرة في العالم.لذلك يعد تشخيص بكتريا S.aureus المقاومة للمثسيلين من خلال تطوير طريقة سريعة و حساسة لهذا التشخيص من اهم الاهداف للصحة العامة . استخدمت طريقة التضاعف التسلسلي المزدوج لعينات البكتريا السريرية ، حيث تم تطوير طريقة الـReal-Time PCR ببادئات مزدوجة للتشخيص السريع لعينات البكتريا المحلية . استخدمت عشرون عزلة بعد تشخيصها بواسطة الطريقة التقليدية ( disk diffusion method) وبعد ان تم استخلاص الدنا منها و اجراء عملية التضاعف التسلسلي لها باستخدام بادئان بنجاح احدهما متخصص لصفة المقاومه mecA بحجم 533 قاعدة نايتروجينية و اخر متخصص لتعريف هذا النوع femA بحجم 318 قاعدة نايتروجينية . ان حساسية هذا الاختبار قد وصلت الى تركيز 30مايكرو غرام /مل . ولغرض ايجاد طريقة سريعة وحساسة في الوقت نفسه للتعرف على هذه البكتريا ، اجريت عدة تخافيف متسلسلة على الدنا المستخلص وتم اجراء فحص التضاعف التسلسلي بطريقه الـ Real-Time باستخدام صبغة سايبر الخضراء . واثبتت النتائج امكانية استخدام هذه الطريقة لتعريف البكتريا المقاومة للمثيسلين في العينات السريرية .

methicillin-resistance --- Staphylococcus aureus --- MRSA --- PCR --- mecA --- femA --- SYBR