research centers


Search results: Found 1

Listing 1 - 1 of 1
Sort by

Article
Isolation and Studying Cathepsin B Enzyme from Normal Human Serum
عزل ودراسة إنزيم كاثابسين B من مصل دم الإنسان السليم

Authors: Rafad R. Saduon رفد ربيع سعدون --- Tareq Y. Ahmad طارق يونس احمد
Journal: Rafidain journal of science مجلة علوم الرافدين ISSN: 16089391 Year: 2011 Volume: 22 Issue: 3A Pages: 73-87
Publisher: Mosul University جامعة الموصل

Loading...
Loading...
Abstract

The work included the isolation of cathepsin B enzyme from normal human serum using different biochemical techniques which included: ammonium sulfate precipitation, dialysis and gel filtration chromatography on sephadex G-100. Furthermore, the comparative molecular weight of cathepsin B enzyme which is partially isolated from serum was found to be (24,000 ± 500 Da) by gel filtration chromatography. The results also showed that the optimum conditions of cathepsin B enzyme activity were obtained using sodium phosphate (100 mmol/L) as a buffer at pH (6.0), at a temperature (40 ˚C) and (1 mmol/L) of BANA as a substrate. Using Linweaver Burk plot, it was found that Vmax and Km have the values of (346.20 U/L) and (0.489 mmol/L) respectively.The results also showed that the activity of cathepsin B enzyme was increased using thiol compound. Cysteine showed a greater activation than β-mercaptoethanol. The activation of cathepsin B enzyme was greater in the presence of EDTA in the reaction mixture.Finally, the effect of iodoacetate, calcium chloride, mercury chloride, zinc sulfate and potassium cyanide on the activity of cathepsin B was studied. These compounds showed strong inhibition on the activity of cathepsin B. The inhibition of cathepsin B by mercury chloride was irreversible type of inhibition at a concentration (0.01 mmol/L).

تضمن البحث عزل إنزيم كاثابسين B من مصل دم شخص سليم ظاهرياً باستخدام التقنيات الحياتية المختلفة، وقد تضمنت خطوات العزل الترسيب بكبريتات الأمونيوم والفرز الغشائي والترشيح الهلامي باستخـدام هلام ((Sephadex G-100، وكان الـوزن الجزيئـي التقريبـي للإنزيـم المعـزول بحـدود(500 Da 24,000 ± ) باستخدام تقنية الترشيح الهلامي. ومن خلال دراسة الظروف المثلى لقياس فعالية إنزيم كاثابسين B المنقى جزئياً، تبين أن الإنزيم يعمل في ظـروف مثلى باسـتخدام المحلول المـنظم فوسفات الصوديوم بتركيز(100 mmol/L) والأس الهيدوجيني pH (6.0) ودرجة حرارة (40˚C) وتركيز(1 mmol/L) من مادة الأساس N-Benzoyl-DL-Arginin-β-Naphthylamide (BANA) ، وبلغت قيمة ثابت ميكيلس -منتن والسرعة القصوى للإنزيم باستخدام رسم لاينويفر- برك (0.489 mmol/L) و(346.20 U/L) على التوالي.وأشارت النتائج إلى أن فعالية إنزيم كاثابسين B المنقى جزئياً تزداد باستخدام بعض المركبات الحاوية على مجموعة الثايول، وأن تأثير السستين أكبر من تأثير بيتا - مركبتوإيثانول ويزداد تأثير هذه المركبات بوجود مادةEDTA في محلول التفاعل.وأخيراً تمت دراسـة تأثير مركبات أيودوأسيتيت وكلوريد الكالسـيوم وكلوريد الزئبق وكبريتات الخارصين وسيانيد البوتاسيوم على فعالية الإنزيم، وقد أظهرت تأثيراً تثبيطياً بنسب متفاوتة لعمل الإنزيم. وكان التثبيط من النوع غير العكسي عند اسـتخدام كلوريد الزئبقHgCl2 بتركيز(0.01 mmol/L).

Listing 1 - 1 of 1
Sort by
Narrow your search

Resource type

article (1)


Language

Arabic (1)


Year
From To Submit

2011 (1)