The present study is conducted to in restigate the bacteria Pseudomonas to theheavy metals. The isolates themselves are submitted to a test to examine theirresistance to three types of minerals (cooper, mercury and nickel ) and theirimpact on the growth of the isolates and the formation of biofilms. Besides, theability of these isolates in the treatment of heavy metals and removing them fromthe environment. The results of using the heavy materials indicate that mercury ismost effective when it is inhabited for the purpose of the growth of local isolates ata concentration 12.5 mg.l-1compared to nickel and copper which inhibit the growthof all isolates at concentration 300 mg.l-1. While it is found that nickel has a vitaseffect on the formation of biofilms of all the isolates where one can find that theformation of membrance is stopped to all isolates at concentration 200 mg.l-1.Actually, the biofilms is formed at a concentration between (0.25–10)mg.l-1underthe effect of mercury and then it is stopped. At all at concentration 250 mg/l. Inrelation to the copper one can find that the formation of biofilms is continued untilit reaches to the concentration 250 mg.l-1 and its formation is stopped at all atconcentration 300 mg.l-1 The effeciency of the five local isolates is varied inremoving the heavy minerals(nickel, copper, mercury) from the cultural media.The results show the ability of these isolates in removing these minerals with ahigh efficiency of concentration (5–250) mg.l-1after that the efficiency of theseisolates is decreased in removing these minerals with the increase of concentrationof the mineral in cultural media

الخلاصةفي مقاومة العزلات المنتخبة Pseudomonas aeruginosa أجریت هذه الدراسة للتحري عن قدرة بكتریامنها للمعادن الثقیلة (النحاس و الزئبق و النیكل) وتأثیرها في نمو العزلات وتكوین الغشاء الحیوي إضافة إلىقابلیة هذه العزلات في إزالة المعادن الثقیلة من البیئة. أظهرت نتائج اختبار المعادن الثقیلة أن عنصر الزئبقكان أكثرها تأثیرا حیث ثبط نمو جمیع العزلات المحلیة عند تركیز 12.5 ملغم. لتر- 1 بالمقارنة مع عنصرا النیكلوالنحاس اللذین ثبطا نمو جمیع العزلات عند تركیز 300 ملغم. لتر- 1. بینما نجد أن عنصر النیكل أثر بشكلكبیر على تكوین الغشاء الحیوي لجمیع العزلات حیث نجد أن تكوین الغشاء قد توقف لدى جمیع العزلات عند10 ملغم. لتر- 1 – تركیز 200 ملغم. لتر- 1. فیما نجد أن الغشاء الحیوي قد تكون عند التركیز مابین ( 0.25تحت تأثیر الزئبق وتوقف بشكل نهائي عند التركیز 250 ملغم. لتر- 1. أما بالنسبة لعنصر النحاس فنجد أنتكوین الغشاء الحیوي قد إستمر وصولا إلى تركیز 250 ملغم. لتر- 1 وقد توقف تكوینه بشكل نهائي عند التركیز300 ملغم. لتر- 1. وتباینت كفاءة العزلات المحلیة المستعملة في إ ا زلة معادن النیكل و النحاس من الوسط250 ملغم. لتر- 1، بعد ذلك انخفضت الكفاءه في – الزرعي، إذ أزیلت هذه المعادن بكفاءة عالیة من تركیز 5– إزالة هذه المعادن مع زیادة تركیز المعدن في الوسط الزرعي، وكانت كفاءة الإ ا زلة لعنصر الزئبق( 0.25. 12.5 ) ملغم. لتر- 1

Biofilms --- Minerals --- Pseudomonas Aeruginosa.

Microorganisms growing in a biofilm are correlating with chronic human infections and are highly resistant to immune system, antimicrobial agents and difficult to remove from the infected host. There are different methods to determine biofilm production such as Microtitre Plate (MtP) method , Congo Red Agar method (CRA) and Tube Method (TA) method .This study was carried out from December 2015 to september 2016, 580 specimens were obtained from patients at different hospitals in Erbil city/ Iraq. Staphylococcus aureus clinical isolates were identified phenotypically by different biochemical and molecular tests. One hundred isolates were found to be Staphylococcus aureus. MtP, CRA and TA tested Biofilm determination. This study was aimed to compare three methods of biofilm production. The results found that the accuracy and specificity of MtP was 100%, while it was 87%, 75% and 91% ,81.25% for CRA and TA methods respectively . The MtP method was considered to be superior to CRA and TA methods, and this method was the better screening for biofilm formation than CRA and TA methods, so this method can be a reliable quantitative tool for detection of biofilm formation in clinical isolates of S. aureus

الكائنات الحية الدقيقة التي تنمو في الغشاء الحيوي تكون مرتبطة مع الالتهابات البشرية المزمنة إذ تقاوم بدرجة عالية الجهاز المناعي، والعوامل المضادة للميكروبات وتكون صعبة الاستئصال من المضيف المصاب. هناك طرق مختلفة لتحديد إنتاج الغشاء الحيوي مثل اطباق المعايرة الدقيقة (MtP) ، طريقة اكار احمر الكونغو (CRA) ، وطريقة الالتصاق بالانابيب (TA) نفذت هذه الدراسة من كانون الاول 2015 إلى أيلول 2017 ، تم الحصول على 580 عينة من المرضى في مستشفيات مختلفة في مدينة أربيل / العراق . العزلات السريرية للمكورات العنقودية الذهبية تم تشخيصها من خلال الاختبارات البيوكيميائية المختلفة والتشخيص الجزيئي ، فوجد مئة عزلة كانت تعود للمكورات العنقودية الذهبية ، وتم تحديد تكوين الغشاء الحيوي بواسطة اطباق المعايرة الدقيقة، طريقة اكار احمر الكونغو ، وطريقة الالتصاق بالانابيب. كان هدف هذه الدراسة هو مقارنة ثلاث طرق لتحديد الأغشية الحيوية، فاظهرت النتائج أن دقة وخصوصية MtP تكون 100٪ ولكن 87٪ ، 75٪ و 91٪ ، 81.25٪ كانت دقة وخصوصية CRA و TA على الترتيب. وجد أن طريقة MtP تكون متفوقة على طريقة CRA وTA وكانت هذه الطريقة هي الافضل لفحص تشكيل الغشاء الحيوي من طريقة CRAو TA ، كذلك وجد أن MtP طريقة كمية موثوق بها للكشف عن تشكيل الغشاء الحيوي في العزلات السريرية للكائنات الحية الدقيقة.

Biofilms method --- phenotypic methods --- S.aurus.

A total of 479 bacterial isolates were collect from 409 swabs from the teeth surfaces teeth and gingiva of the auditors admitted to the centers specialist and dental clinics in Al-Diwaniya city for different ages by specialist doctor on period from 1/11/2012 AC till 1/3/2013 AC. Bacterial isolates diagnosed by Vitek compact 2 system to positive and negative gram stain head it Streptococcus spp. by highest percentage of 31.52%, followed by Staphylococcus spp. by 20.45% and Lactobacillus spp. by 12.52% and Candida spp. by 10.64%, and follow then some germs that made a few percentages compared to the bacteria mentioned, also S. mutans obtain among microbial species isolated from teeth surfaces and gingiva frequency highest in the number of isolates (56 isolate) and tested their on biofilm formations; then 44 isolation (44.64%) high formations, 16 isolation (28.57%) medium formations and 15 isolation (26.79%) non biofilm formations. The impact of carbohydrates appear apparent on S. mutans isolates in biofilm formations on bio-growth medium; then amounted to the presence of sucrose 35.71%, followed by glucose with fructose together in the medium (25.00%) then glucose (16.07%) and fructose (12.50%), while the percentage of carbohydrates absence in the growth medium 10.71%.The drug sensitivity of S. mutans isolates were tested trend 11 antibiotic by using disks diffusion method which showed that the resistance of isolates to antibiotics was higher than the sensitivity of her as well as they were increase after biofilm formations; where resistant isolates convey to Erythromycin before and after biofilm formations (98.21 and 94.64)%, Amoxicillin (85.71)% each for both, and Ampicillin (80.35 and 83.92)%, Nalidixic acid (80.35 and 87.50)%, Cefotaxime (69.64 and 75.00)%, Chloramphenicol (69.64 and 89.28)%, Amoxicillin-Clavulanic acid (58.92 and 76.78)%, Gentamicin (57.14 and 78.57)%, Tetracycline (55.35 and 66.07)% each respectively, while showed high sensitivity to Amikacin (25.00 and 48.21)% and Trimethoprim sulfamethaxale (7.14 and 19.64)% each, respectively. 12 isolates elected tested from the 56 isolates of S. mutans; as a biofilm producer and more resistant to antibiotics and were containing 16s RNA gene was representing diagnostic gene for these bacteria using polymerase chain reaction (PCR) technique, results also showed DNA sequences of the conservative gene (16s rRNA) in isolates of S. mutans biofilm formations and by means of phylogenetic tree analysis for that gene, the similarity appeared between S. mutans local strain with Spain standard strain (AJ554208.1) in 14 and 15 nucleotide locations.

تم عزل 479 عزلة بكتيرية من 409 مسحة من سطوح الأسنان واللثة للمرضى المراجعين من كِلا الجنسين وبأعمارٍ مختلفة للمراكز التخصصية وعيادات الأسنان في مدينة الديوانية بعد أن شُخصوا سريرياً بإلتهابات الفم (الأسنان واللثة) من قِبل الأطباء المختصين للمدة من 1/11/2012م ولغاية 1/3/2013م.شُخِّصت العزلات البكتيرية بإستخدام جهاز الفايتك إلى موجبة وسالبة لصبغة ﮔرام تصدرتها بكتريا المكورات السبحيَّة Streptococcus spp. بأعلى نسبة بلغت 31.52% تلتها بكتريا المكورات العنقودية Staphylococcus spp. بنسبة 20.45% وبكتريا عُصيات الحليب Lactobacillus spp. بنسبة 12.52% ثم خميرة Candida spp. بنسبة 10.64%, وتوالت بعدها بعض البكتريا التي أحرزت نسباً قليلةً مقارنةً بالبكتريا المذكورة, كما أحرزت بكتريا المكورات السـبحيَّة الغشائية Streptococcus mutans من بين الأنواع البكتيرية المعزولة من سطوح الأسنان واللثة أعلى تردداً في عدد العزلات (56 عزلة) واُختُبِرت قدرتها جميعها على تكوين الغشاء الحيوي؛ إذ كانت 44 عزلة (44.64%) عالية التكوين لهُ و 16 عزلة (28.57%) متوسطة التكوين و 15 عزلة (26.79%) عديمة التكوين للغشاء الحيوي. وظهرَ تأثير الكربوهيدرات واضحاً على عزلات S. mutans في تكوينها للغشاء الحيوي على وسط النمو؛ إذ بلغت نسبتها بوجود السكروز 35.71% تلاهُ الكلوكوز مع الفركتوز معاً في الوسط نفسه بنسبة 25.00% ثم الكلوكوز (16.07%) والفركتوز (12.50%), بينما بلغت نسبتها بغياب الكربوهيدرات في وسط النمو 10.71%.اُختُبِرت الحساسية الدوائية لعزلات S. mutans تجاه 11 مضاداً حيوياً بإستخدام طريقة الإنتشار بالأقراص التي أوضحت أنَّ مقاومة العزلات للمضادات الحيوية كانت أعلى من حساسيتها لها إضافةً إلى أنها إزدادت بعد تكوينها للغشاء الحيوي؛ حيث بلغت مقاومة العزلات لمضاد الإرثرومايسين قبل وبعد تكوينها للغشاء الحيوي (98.21 و 94.64)% والأموكسيسيلين (85.71)% لِكلٍ منهما والأمبيسيلين (80.35 و 83.92)% وحامض الناليدسك (80.35 و 87.50)% والسيفوتاكسيم (69.64 و 75.00)% والكلورامفينيكول (69.64 و 89.28)% والأموكسيسيلين – حامض الكلافيولانك (58.92 و 76.78)% والجنتامايسين (57.14 و 78.57)% والتتراسايكلين (55.35 و 66.07)% لِكلٍ منهما على التوالي, فيما أظهرت حساسيتها العالية لِمضادي الأميكاسين (25.00 و 48.21)% والترايميثوبرايم سلفاميثاكسيل (7.14 و 19.64)% لِكلٍ منهما على التوالي.إختُبِرت 12 عزلة منتخبة من 56 عزلة من S. mutans؛ بإعتبارها منتجةً للغشاء الحيوي وأكثر مقاومةً للمضادات الحيوية وإمتلاكها لمورثة 16S rRNA التي تُمثّل المورثة التشخيصيّة لها بإستعمال تقنية تفاعل سلسلة إنزيم البلمرة (PCR), كما بيَّنت نتائج تتابع تسلسل الحامض النووي DNA للموَّرث المحافظ (16S rRNA) في عزلات S. mutans المكونة للأغشية الحيوي وبوساطة تحليل الشجرة الوراثية لذلك الموَّرث, ظهرَ تشابهً بين سلالة S. mutans المحلية مع السلالة القياسية الأسبانية (AJ554208.1) في الموقعين النيوكليوتيدين 14 و 15.

Streptococcus mutans --- Biofilms --- Antibiotics --- molecular characterization --- التوصيف المظهري --- المكورات السبحية --- الأغشية الحيوية --- المضادات الحيوية --- التوصيف الجزيئي

This research tried to evaluate the inhibitory activity of some natural, nontoxic, and inexpensive materials such as Iodized Salt (IS), Concentrated Natural Lemon Juice (CNLJ) and combination of both on one month old biofilm formed on 2cm2 of cutting board. The treatment period ranged from 24 to 72 hours and the results shows that the combination of (IS+CNLJ) for 24 hours have a cidal effect on all microorganisms that formed biofilm on cutting board. Streptococcus pneumonae, E.coli, Klebsiella spp., Proteus vulgaris, Salmonella spp., Staphylococcus spp., Pseudmonas spp., Listeria spp. and Candida spp. were isolated from cutting board, Knives, hands and inner surface of plastic container with different percentage ranging from 1.4%to 15.4%

شمل البحث محاولة تقييم الفعالية التثبيطية لبعض المواد الطبيعية غير السامة والرخيصة الثمن والتي تضمنت ملح الطعام باليود وعصير الليمون المركز ضد الأغشية الحيوية بعمر شهر واحد المتكونة على مساحة (2سم2) من لوح تقطيع الأسماك الطازجة. تراوحت فترة المعالجة بين (24- 72) ساعة وأظهرت النتائج بأنّ مزيج ملح اليود مع عصير الليمون لمدة 24 ساعة كان له تأثيرٌ قاتلٌ لكل الأحياء المجهرية التي كوّنت الأغشية الحيوية.تمّ في هذا البحث أيضاً عزل كل من Streptococcus pneumoniae، E. coli، Klebsiella spp.، Proteus vulgaris، Salmonella spp.، Staphylococcus spp.، Pseudomonas spp.، Listeria spp.، Candida spp. من ألواح تقطيع الأسماك والسكاكين وأيدي العاملين والأسطح الداخلية لحاويات الأسماك بنسب مختلفة تراوحت بين (1.4%) إلى (15.4%).

Fresh fish biofilms --- Fish cutting board --- Lemon juice --- Iodized salt --- الاغشية الحيوية للأسماك الطازجة، ألواح تقطيع الأسماك، عصير الليمون، ملح الطعام مدعم اليود