research centers


Search results: Found 1

Listing 1 - 1 of 1
Sort by

Article
CLONING AND EXPRESSION MERE GENE RELATED TO TN501 TRANSPOSON AND INVESTIGATING IT’S FUNCTION AND EFFECTS ON SWIMMING MOTILITY
الاستنسال والتعبير الوراثي لجين MerE العائد للجين القافز Tn501 والتحري عن وظيفته وتأثيره في الحركة السابحة للبكتريا

Author: سوسن ساجد الجبوري
Journal: Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية ISSN: 18154794 Year: 2009 Volume: 8 Issue: 2 Pages: 586-594
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Loading...
Loading...
Abstract

In this study, MerE gene related to Mer operon (Mercury resistance) from the original Tn501 transposon was amplified using PCR technique. Plasmid pUB3466 represent the cloning vector pBR322 containing the transposon Tn501 was used as a template. The PCR process was fully successful and only one band about 1.2 kbp was appeared in the gel electrophoresis. The amplified gene was cloned using pGEM-T easy vector, then transformed to a competent strain E. coli DH5α. Both of the cloning and transformation process succeeded and transformed cells were selected on selective media containing Ampicillin final concentration 100 µg/ml. Result of plasmid content analysis revealed that the transformed cell harboured one plasmid band represent the vector with MerE gene. E. coli DH5α with and without the cloned vector were used in swimming motility assay using semisolid LB media in the present and absent of HgCl2 final concentration 1µg/ml in order to study MerE function. The result showed that there was diminishment in swimming movement and the growth zone clearly decreased when HgCl2 was added. This result revealed that MerE gene may play role in transport mechanism also modified the behavior of the microorganism leading to altered motility.

أستخدم في هذه الدراسة تقنية التفاعل السلسلي للبوليمريزPCR لتكثير جين MerE العائد لعامل مقاومة الزئبق في الجين القافز Tn501. أستعمل البلازميد pUB3466 الذي يمثل البلازميد pBR322 مضاف له الجين القافز Tn501 كقالب أساس. لقد كانت عملية PCR ناجحة إذ ظهرت حزمة واحدة بحجم 1.2 كيلو قاعدة في هلام الترحيل الكهربائي. أستنسل الجين المضاعف في ناقل الاستنسال pGEM-T ثم أجريت عملية التحول الوراثي بإستخدام الخلايا الكفوءة للسلالة القياسية E. coli DH5α. لقد كانت عمليتا الأستنسال والتحول الوراثي ناجحتين وتم انتخاب الخلايا المحولة وراثياً على أوساط انتخابية حوت الامبسلين تركيز نهائي 100 مايكروغرام/مليلتر. أوضحت نتائج التحري عن المحتوى البلازميدي احتواء الخلايا المحولة وراثياً على حزمة بلازميدية واحدة متمثلة بالناقل مع جين MerE. أستخدمت السلالة E. coli DH5α الحاوية وغير الحاوية على البلازميد المستنسل لإجراء اختبار الحركة السابحة بإستعمال وسط LB نصف الصلب، وبوجود وعدم وجود كلوريد الزئبقHgCl2 بتركيز نهائي 1 مايكروغرام/مليلتر. أوضحت النتائج حصول إنحسار في الحركة السابحة إذ صغرت مناطق النمو بشكل واضح بوجود HgCl2. قد تشير هذه النتيجة إلى ان جين MerE يلعب دوراً في ميكانيكية نقل الزئبق، وقد أدى إلى تحوير سلوك الكائن المجهري مسبباً تغييراً في الحركة.

Listing 1 - 1 of 1
Sort by
Narrow your search

Resource type

article (1)


Language

English (1)


Year
From To Submit

2009 (1)